| 应用材料：

新鲜分离健康产妇脐血的CBMC，采用细胞计数的方法检测免疫细胞的增殖及细胞倍增时间，用流式检测CD3^- CD56⁺、 CD3⁺ CD56⁺、 CD56⁺CD16⁺细胞比例。

| 实验材料：

健康产妇脐血的CBMC（枸橼酸钠采血袋）, Cyto-NK™试剂盒（含有NK细胞维持因子）；

| 实验步骤：（简述）

1)       用枸橼酸钠采血袋采集健康供者脐血100mL，按照说明书操作。

2)       第3天，显微镜下观察细胞形态后，补加1-2倍体积新鲜激活培养基，继续培养。

3)       第5天，用一次性10ml无菌吸管吸取细胞培养液，轻轻冲洗培养瓶贴壁细胞，尽量回收贴壁细胞。将细胞混悬液移入新的一次性50ml灭菌离心管，取少量计数。离心 350g×5分钟，用NK细胞激活培养液重悬，将细胞密度调整至1×10⁶ cells/mL，按照容积比6%添加自体血浆，继续培养。

4)       第6天，镜下观察，适量补加新鲜激活培养基，并按照补液体积5%左右补加自体血浆。

5)       第7天，补加上述新鲜扩瓶培养基，血清终浓度控制在2%左右。

6)       第8-20天，根据镜下观察及培基颜色变化，补加新鲜扩瓶培养基。

7)       第21天收获细胞。

8)       整个扩增过程中0、14、21天计数，统计细胞增殖情况，培养14、21天取部分细胞进行流式表型检测。

| 实验结果：

| 流式检测：

| 操作流程：

| 技术指标：

培养 14 天后，细胞数量达到 2~8×10^9 cells 以上，则可根据需求安排使用，也冻存后 放入液氮保存，待检测合格后安排使用。

注意:

1. 细胞培养第 14 天，一般 CD3-CD56+>75%，CD56+>80%，CD16+>85%，扩增倍数200 倍; 

2. 细胞培养第 21 天，一般 CD3-CD56+ >85%，CD56+>85%，CD16+>90%，扩增倍数300~500 倍。

3. 由于个体样本存在差异，不同样品建议根据实际情况选择培养时间，收获细胞。